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GEN eBook | 病毒学/病毒免疫学的新研究与开发策略
人阅读 发布时间:2021-05-14 09:20
GEN eBook包含一系列文章和研究,重点关注创新的研究和开发策略,让科学家们能够充分利用新方法和获得的新见解,解决病毒生物学的复杂问题,从而加快发现和开发抗病毒感染新疫苗的速度。
—— 关键主题 ——
- 流感疫苗可预防患有镰刀形细胞症小鼠的H1N1感染
- 细胞系中的微粒释放及其抗流感活性
- 接受肾透析的HIV阳性患者在接种水痘-带状疱疹病毒疫苗后的血清学和T细胞反应
- 使用新型多重T细胞活化试验进行的激酶抑制剂表型筛选
- 对四价丙型肝炎病毒样颗粒疫苗佐以Toll样受体2型激动剂的抗体应答
—— 精彩预览 ——
利用生物制剂、小分子或基因工程的方法调节TCR信号通路,在众多治疗领域发挥重要作用,包括癌症免疫治疗、过继细胞治疗及疫苗开发。
自身免疫性疾病的一个主要原因是某些干扰导致TCR信号增强和T细胞过度激活。例如,一些遗传缺陷、突变和其他机制导致T细胞激酶活性增强,从而参与许多自身免疫病的病理发生,使它们成为有吸引力的T细胞活化抑制剂靶点。
目前,FDA批准的激酶抑制剂(KI)有37种,主要用于肿瘤治疗,此外约有250种正在临床试验中。专门针对T细胞激活早期信号事件的KI药物,已成为治疗自身免疫性疾病的新焦点,最近FDA已批准KI治疗类风湿性关节炎。
在开发调节TCR活性的药物和疗法时,需要对细胞功能和健康进行分析。为了满足快速监测T细胞功能的需要,我们采用高通量流式细胞术开发了一种优化的、高内涵的、多重性检测方法来分析T细胞激活,可用于同时评估T细胞表型、T细胞激活标记物、细胞增殖、细胞活力及其分泌的细胞因子定量,并适用于96孔或384孔板的高通量筛选需求。
- 检测T细胞活化早、中、晚期的活化标志,分别是CD69、CD25和HLA-DR
- 评估CD4和CD8细胞的增殖水平
- 分析CD4和CD8细胞的活性
- 定量细胞分泌的多种细胞因子,以评估T细胞功能
我们将这些分析的指标作为小分子库的筛选标准,用系统内置的筛选工具(Profile Map)进行筛选。
如下图所示,左边面板(图A)显示了筛选中整合的11个参数,及每个指标的用户定义阈值。
通过这种筛选方法,我们鉴定出27种不同的KI,它们抑制所有的T细胞激活标记物及细胞因子分泌(如图B所示)。
此外,本次实验还用不同浓度的化合物(20uM - 20nM)处理细胞,以获得抑制浓度曲线及IC50。这些数据显示这些KI具有不同的MOA特性。