多球、共培养、3D肿瘤试验
的实时活细胞分析

越来越多的证据表明，与2D单层细胞模型相比，涉及微组织和类器官的研究能提供更多的预测性和转化观察结果。多细胞肿瘤球在肿瘤学和肿瘤免疫学研究中的应用也在增加。

目前用于评估肿瘤球体生长和缩减的方法通常受到耗时、昂贵和、或费力的分析工作流程的限制。这可能包括荧光探针的生物学干扰，终点法分析可能错过有见地的时间点信息，或间接生化读数忽略有价值的形态学洞察力。
 

Vitanovski/Getty图像

 

Overview
应用说明《多球、共培养、3D肿瘤试验的实时活细胞分析》描述了使用Incucyte® 活细胞分析系统和Incucyte® 3D多肿瘤球分析来研究3D肿瘤多球的生长，可与成纤维细胞或免疫细胞共培养，捕捉采用单时间点方法可能错失的数据。增强型景深明场（DF-明场）图像采集能够对生长在细胞外基质（Matrigel™）上的多肿瘤球进行长时间成像。
 

Incucyte® 活细胞分析系统

这一优越的图像采集可获得具有高对比度的明场图像，明场目标的大小、计数和偏心度会随时间自动绘制，提供关于肿瘤球形成和生长速率的丰富的信息。可采集、分析及绘制数千张图像，可以同时运行多达六块96孔板，以提高通量。

 

 

   检测工作流程   
 

本文展示了验证方法和数据，以阐述Incucyte® 活细胞分析系统的能力，包括动态可视化和量化基质细胞对肿瘤多球形态及对化疗药物敏感性的影响，并评估免疫细胞介导的对肿瘤多球的杀伤毒性。

- 活细胞分析表明，SK-BR-3与NHDFs共培养时可形成更紧密的多球体
- 活细胞成像显示NHDFs对MDA-MB-231多球形态的时间效应
- 阐明一组乳腺肿瘤多球体的细胞类型特异性时间生长曲线
- 在96孔板完成实时化合物分析的能力
- 实时动态可视化和定量抗体依赖性细胞介导的对靶肿瘤多球的细胞毒性（ADCC）的能力
- 赫赛汀激活的PBMC导致HER2阳性多球体活力的浓度依赖性丧失

 

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数据结果抢先看
 

Incucyte® S3孔板视图可以快速可视化和定量处理效果。MCF7细胞与NHDFs共培养，接种于预包被（Matrigel）的平底96孔板（1:1比例，各1000细胞/孔），形成多球（3天）。然后用已知的标准护理和梯度稀释的细胞毒性化合物处理球体（5天）。Incucyte® 微孔板视图显示了处理对多球大小的影响。顶部图像显示处理后5天明场目标面积（Brightfield Object Area，μm2）识别mask（黄色）。底部图像显示每孔总明场目标面积（Total Brightfield Object Area，μm2）（y轴）随时间的变化（处理后0–5天）（x轴）。
 

赫赛汀诱导的PBMC对多球增殖的影响。将稳定表达核RFP（SKOV3-NR、MCF7-NR）或胞质GFP（BT-474-CyG）的肿瘤细胞接种于平底96孔板的Matrigel上（1000细胞/孔），形成多球体（3天），然后加入新分离的PBMC（E:T，5:1）和赫赛汀。Incucyte® S3明场和荧光图像（7天，SKOV3-NR、MCF-NR；或10天，BT-474-CyG），对比未加入PBMC（上图）和加入PBMC（下图）的情况下，赫赛汀对肿瘤球增殖的影响（明场mask显示为黄色）。注意在PBMC存在时HER2阳性（SKOV3和BT474）多球体荧光强度的损失。
 

HER-2阳性多球的ADCC免疫细胞杀伤的动态量化。肿瘤细胞接种于96孔平底板的Matrigel上（1000细胞/孔），形成多球（MS）3天。一旦形成，MS与新鲜分离的PBMCs（E:T，5:1）共培养，并用连续稀释的赫赛汀处理。时间进程显示多球体的死亡，通过球体明场目标内荧光强度的损失进行量化。赫赛汀的浓度响应曲线显示HER2阳性多球体（SKOV3和BT-474）之间的敏感性差异。激活的T细胞群（抗CD3和IL-2，10 ng/mL）处理，导致了所有细胞类型的最大MS细胞毒性。每隔6小时收集数据，总计10天。每个数据点代表平均值±SEM，n=4孔。