随着国内科研水平的提高以及先进技术的使用，国内发表的诸如CNS高水平文章也越来越多，基于生物层干涉（BLI）技术的Octet®分子互作由于具有简单、快速、结果准确的优点，且具有广泛的应用方向。

仅2022年第一季度，Octet®国内CNS文章就达到了5篇！涉及各种高通量、粗样品的动力学和竞争实验，也和我们身边新冠疫苗和治疗手段息息相关。今天，陈老湿就来介绍一下这几篇文章。

 

➤ 科兴灭活疫苗加强针可提升对奥密克戎感染的重症保护[1]

从多名三剂新冠疫苗接种者的新冠特异性记忆B淋巴细胞中成功获得323株全人源抗体，用Octet® RED384检测发现这些抗体都与野生型的新冠病毒S蛋白高亲和力结合，其中24株对奥密克戎等突变株均有比较强的抑制活性。这表明三剂疫苗免疫后，约7%的记忆B淋巴细胞携有广谱性中和抗体。从中选取了几株活性最高的广谱性抗体（比如编号347，265抗体），并对其与S蛋白的复合物进行了结构解析，发现了奥密克戎的抗体逃逸表位G446S。
 

将带His标签的S蛋白固化在NTA传感器上，分别与347和265抗体结合，发现347和265结合不同的表位（Octet® RED384）。

第三针疫苗赶紧打！几百个抗体的亲和力测试，高通量Octet®舍我其谁！

 

➤ 可雾化吸入的广谱抗新冠全人源纳米双抗药/复旦大学[2]

复旦大学应天雷组研发了一种治疗新冠的广谱双特异性全人源纳米抗体Bn03，该抗体由该课题组之前发现的两个靶向病毒S蛋白的保守表位的纳米抗体n3113v和n3130v重组而成，能够高效中和包括奥密克戎在内的各种流行变异株。同时，因分子量比较小可作为雾化吸入制剂，在新冠轻症和重症小鼠模型中显现出很好的疗效。论文还发现了一类隐藏在病毒刺突蛋白三聚体内部的高度保守表位，对广谱疫苗和药物的研发具有启示作用。
 

Bn03可以高亲和力地结合目前已知多种新冠毒株
 

接种疫苗后血清RBM（受体结合结构域）抗体和非RBM抗体测试：将RBD结合在NTA传感器上，直接与血清结合的BLI信号Xt为所有RBD抗体，先结合ACE2再结合血清信号为Xm的是非RBM抗体，RBM抗体为Xt-Xm。发现非RBM抗体与奥密克戎的结合活性密切相关。

血清等粗样品检测，Octet®在行！

 

➤ 西湖大学发现艰难梭菌毒素入侵人体的新受体[3]

艰难梭菌是一种厌氧的革兰氏阳性细菌，会导致抗生素相关性腹泻和伪膜性肠炎等疾病，其中一个分支会分泌TcdB2，TcdB4毒素。目前，这些毒素在小肠上皮的受体并不明确。西湖大学陶亮组用CRISPR/Cas9的基因敲除文库筛选技术发现了组织因子途径抑制因子（TFPI）是这些毒素的受体。并解析了TFPI/ TcdB4复合物结构。用Octet®检测了两者之间的亲和力，同时动力学实验表明，TcdB4与FXa均可与TFPI的同一loop结合，相互之间是竞争关系。这与前人的研究以及结构学是完全一致的。这项研究对于揭示和理解艰难梭菌感染的致病机制，并且为超毒力分支菌株引起的艰难梭菌的感染预防和治疗新方法的开发提供了重要的理论依据。
 

用Octet® RED96e和Anti-human Fc传感器固化Fc融合TFPI，与TcdB4结合的亲和力（KD值）达到nM级别。
 

Octet®固定TFPI，先结合TcdB4后，FXa的结合信号显著下降（左图）。反过来亦是如此（右图）。即FXa与TcdB4相互阻断。

亲和力测试，竞争实验，一机多用。

 

另外两篇文章，主要检测奥密克戎S蛋白和人受体ACE2以及中和抗体的亲和力，BLI数据质量良好,与前面文章类似，就不做一一介绍了[4][5]。

Octet®分子互作分析系统的优势在于：

- 非标记Direct binding是趋势，结果更准确;

- 快速测定亲和力，更加定量化地表征分子互作;

- 无洗涤步骤，可测弱亲和力（解离快）;

- 写入了美国药典，文章多，认可度广;

- 万金油技术，可以用与检测DNA，小分子，蛋白质等各种生物分子，比如这篇文章检测的就是病毒颗粒样品;

- 操作简便，耗材及维护成本低。

我们的口号是：Octet®让您的分子互作结果更放心！


作为成熟的分析方法，Octet®已协助包括新冠疫苗在内的多种疫苗的研究和开发，应用于多个关键环节，包括表位设计、识别及特征分析，病原体多样性和分布，抗体亲和力测定，宿主免疫反应特征、多样性和分布，核酸和分子病原体-宿主相互作用研究，以及治疗药物及临床研究等。了解更多基于Octet®的疫苗研发策略，观看讲座：


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-参考文献-

Memory B cell repertoire from triple vaccinees against diverse SARS-CoV-2 variants.Nature

Broad neutralization of SARS-CoV-2 variants by an inhalable bispecific single-domain antibody.Cell

TFPI is a colonic crypt receptor for TcdB from hypervirulent clade 2 C. difficile.Cell

https://www.science.org/doi/10.1126/science.abn8863

Structural and functional characterizations of infectivity and immune evasion of SARS-CoV-2 Omicron.Cell