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告别EMSA,试试CRISPR女神用的核酸互作神器
人阅读 发布时间:2021-05-07 14:57
核酸结合与凝胶迁移实验(EMSA)
核酸(DNA/RNA)和蛋白的相互作用检测在研究基因调控、适配子筛选等方面有着广泛的应用,目前经典的研究方法主要是凝胶迁移实验(EMSA)。该方法主要包含探针标记和纯化、配制胶、电泳、转膜以及分析等步骤,耗时冗长且操作繁琐。虽然结果可用于定性和定量分析,但实验者经常被定量不准确、重复性差等问题所困扰。
“卖家秀”VS “买家秀”……
如果您希望
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· 在15分钟内获得实验结果
· 更准确,更丰富的定量结果(结合速率,解离速度,亲和力)
· 无需制备探针,样品仅需稀释就可用于检测
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那赶紧试试基于生物层干涉(BLI)技术的Octet相互作用分析仪(原ForteBio)!
15分钟迅速解决战斗!
实验流程包含:
(1)缓冲液平衡1分钟;
(2)1-3分钟的核酸固化;
(3)二次平衡缓冲液1分钟;
(4)分析物和配体结合;
(5)分析物解离。
实验者只需要准备生物素化的核酸以及普通蛋白样品,再加上Octet链霉亲和素传感器(Octet SA Biosensor)就行啦!
2020年诺奖获得者
CRISPR女神Jennifer也在用BLI技术
目前已经有几百篇已发表的文章(其中CNS十篇左右)用BLI技术做核酸和其他物质的相互作用!其中包括2020年诺贝尔化学奖获得者,CRISPR-Cas9女神Jennifer Doudna。
CRISPR-Cas9是近几年最火的基因剪辑技术。科学家们利用Cas9,能够切割细胞中的DNA,但Cas9有时也会切割与它靶向的序列相类似的其他DNA序列,也就是所谓的脱靶效应,因此如何精确调控这个系统也同样重要。这就好比坐在没有刹车的汽车上,随时都有可能翻车!
Jennifer的团队在Science Advances期刊上发表了题为“Disabling Cas9 by an anti-CRISPR DNA mimic”的论文,报道他们发现了一种来自于李斯特菌中的抗CRISPR蛋白AcrIIA4,可以阻断Cas9的活性并降低可能导致不良副作用的脱靶基因编辑。
Jennifer的团队在Science Advances期刊上发表了题为“Disabling Cas9 by an anti-CRISPR DNA mimic”的论文,报道他们发现了一种来自于李斯特菌中的抗CRISPR蛋白AcrIIA4,可以阻断Cas9的活性并降低可能导致不良副作用的脱靶基因编辑。
为了进一步掌握AcrIIA4的竞争作用机制,科研人员通过生物层干涉技术研究了AcrIIA4对dCas9-sgRNA与靶标DNA的结合的影响。如下图:
将生物素化的靶点DNA固化在链霉亲和素传感器上,与混入了不同浓度的AcrIIA4的dCas9-sgRNA复合物结合。实验发现混入的AcrIIA4浓度越高,dCas9-sgRNA结合信号越小,说明AcrIIA4会抑制靶点DNA和dCas9-sgRNA的结合。