时光匆匆，2020年已经过去，留下了将近2000篇Octet相关的文献。陈老湿在前一期已经给大家总结了全年的文献之最，今天就给大家解读一下去年12月份的文章精选。既有组蛋白突变与淋巴瘤发病机制关系，也有血清中直接检测新冠病毒抗体方法建立，还有中和抗体关键表位识别对东部马脑炎病毒抑制作用的重要性，以及破伤风疫苗诱导的中和抗体对小鼠的保护作用分析等。

威尔康奈尔医学院等机构的科学家们通过研究发现，组蛋白H1的突变或是诱发淋巴瘤的原因。组蛋白会参与到DNA的卷绕并包装成为一种特殊结构的过程中。淋巴瘤相关的H1蛋白的突变会干扰组蛋白结合并收紧DNA的能力，使得DNA变得更加松散，原本被抑制的基因就会活跃起来，从而促进早期发育阶段的基因表达异常。淋巴瘤或许就源于此。

研究人员分析并比较了一组101个DLBCL患者机体中H1突变和其它基因突变的频率，发现有5种不同形式的H1会在分裂的细胞中发挥作用，其中H1C和H1E的两种突变是淋巴瘤的最常见驱动突变。这对如何利用H1突变来开发淋巴瘤的新型疗法提供启示。

与野生型相比，H1蛋白C端突变体S102F与单核小体的亲和力显著变弱，
即突变会使得H1蛋白丧失正常的结合功能活性
 

加州大学圣克鲁兹分校的研究人员采用Octet高通量分子互作平台开发了新冠病毒抗体血清学检测方法，集高通量、快速和准确定量于一身，并将其命名为“BLI-ISA（生物层干涉免疫吸附法）”。将新冠病毒S-RBD固定在生物传感器上，然后浸入1:8或者1:16稀释的血清样品中，即包含IgG,IgA等所有抗体的总的结合信号。然后再结合胶体金标记的抗人IgG或抗人IgM抗体，体现了IgG或IgA等抗体的特异性结合信号。
 

BLI-ISA检测方法
37个血清样品的检测结果（含新冠病毒抗体阴性，弱阳，强阳血清）
BLI法可以准确地区分所有阴性与阳性样品
 

BLI-ISA法30分钟内完成检测（包括操作和运行），
仅为ELISA法的十分之一

 

Octet一方面可以在血清等粗样品中直接检测，还可以通过整合自动化装置，大幅度提高检测通量，实现长时间的无人值守。

 

10株不同的中和抗体的结合表位结构解析
 

通过分析不同抗体与EEEV病毒的复合物结构，表明EEEV-33结合病毒抗原的Domain A，EEEV-143则结合Domain B。这些抗体可识别不同的抗原位点，这对抑制病毒进入细胞至关重要。其中，EEEV-33和EEEV-143对高致病性EEEV感染的小鼠具有良好的保护作用。这些研究为EEEV中和抗体反应的分子机理提供了基础，有助于疫苗和候选抗体疗法的开发。
 

将重组EEEV E2糖蛋白固定在HIS1K生物传感器上，结合第一抗体(50 ug/mL)，再结合第二抗体(50 ug/mL) 。
将没有结合第一抗体的第二抗体的结合作为最大信号，其他结合过第一抗体的第二抗体信号降低到33%以内的，
认为是与第二抗体完全竞争关系。二抗信号降低到33 ~ 67%之间，认为是部分竞争关系。
而二抗的信号在67%以上，则认为是不竞争的
 

Octet在早期筛选中快速准确地进行抗原表位分析，这在埃博拉病毒，寨卡病毒以及新冠病毒的中和抗体开发与设计中均发挥了重要作用，贡献良多。
 

破伤风梭菌产生的破伤风神经毒素(TeNT)毒性极大，尤其是感染后潜伏期短、发病快，加剧患者的致命风险。开发和设计抗TeNT的中和抗体即是预防和治疗的有效手段之一。
  

北京生物工程研究所的陈薇院士组从一名免疫了TeNT的C端结构域(TeNT- hc)的健康成人体内，分离了记忆B细胞，并鉴定了一系列单克隆抗体。其中13株抗体可与破伤风类毒素(TT)和TeNT-Hc结合，另两株抗体则只识别TT。T3、T7和T9-6这三株抗体可以完全保护小鼠免受TeNT的感染，T2和T18则可显著延长存活时间。这五个中和抗体识别不同的抗原表位。该研究提供了治疗和预防破伤风神经毒素的有潜力的候选药物。
 

免疫接种过程
AHC传感器固定不同的抗体结合TT，5株中和抗体均具有较强的结合，
亲和力KD在0.123 ~ 11.9 nM之间

 

-参考文献-

[1] Yusufova, N et al., Histone H1 loss drives lymphoma by disrupting 3D chromatin architecture. Nature 589, 299–305 (2021).

[2] John V. Dzimianski et al., Rapid and sensitive detection of SARS-CoV-2 antibodies by biolayer interferometry. Scientific Reports 10:21738(2020).

[3] Williamson et al., Human Antibodies Protect against Aerosolized Eastern Equine Encephalitis Virus Infection. Cell 183, 1884–1900 (2020).

[4] Guanying Zhang et al., Tetanus vaccine-induced human neutralizing antibodies provide full protection against neurotoxin challenge in mice. International Immunopharmacology 91, 107297 (2021).